The modified method of luxol fast blue for paraffin-embedded myelin sheath staining / El método modificado de luxol fast blue para la tinción de mielina fijada en parafina

SUMMARY: Histological techniques are the study of animal and human tissues through staining and examining them under a microscope. To demonstrate the axonal degeneration and demyelination in histological studies, the Luxol Fast Blue staining is gold standard techniques. In this study, a new histochemical method based on modified Luxol Fast Blue for the staining of the myelin sheath in sciatic nerve tissues described. The sciatic nerves of rats were removed and then the sciatic nerve was immersed in 10 % formaldehyde for one week and embedded in paraffin block. Next, thin sections (5 µm) were cut, using a microtome and stained with conventional and modified Luxol Fast Blue. Our results showed that a new method of modified Luxol Fast Blue staining can accurately identify the myelin in the sciatic nerve fibers. The current study showed that the Luxol Fast Blue combination with Light Green has a good effect on myelin coloration, and the results of this study are comparable to LFB combination with Sirius red.

RESUMEN: Las técnicas histológicas son el estudio de tejidos animales y humanos mediante tinción y examen bajo un microscopio. Para demostrar la degeneración axonal y la desmielinización en estudios histológicos, la tinción Luxol Fast Blue es una técnica estándar de oro. En este estudio, se describe un nuevo método histoquímico basado en Luxol Fast Blue modificado para la tinción de mielina en los tejidos del nervio ciático. Se seccionaron los nervios ciáticos de ratas y luego el nervio ciático se sumergió en formaldehído al 10 % durante una semana y se fijó en bloque de parafina. Posteriormente, se cortaron secciones delgadas (5 µm) usando un microtomo y se tiñeron con Luxol Fast Blue convencional y modificado. Nuestros resultados mostraron que un nuevo método de tinción Luxol Fast Blue modificado puede identificar con precisión la mielina en las fibras del nervio ciático. El estudio actual mostró que la combinación Luxol Fast Blue con Light Green es un buen efecto sobre la coloración de mielina, y los resultados de este estudio son comparables a la combinación LFB con Sirius red.

Effects of repeated exposure to different concentrations of sevoflurane on the neonatal mouse hippocampus / Efeitos da exposição repetida a diferentes concentrações de sevoflurano sobre o hipocampo de ratos neonatos

Abstract Background and objectives: Developing brain is more vulnerable to environmental risk than is the developed brain. We evaluated the effects of repeated exposure to different concentrations of sevoflurane on the neonatal mouse hippocampus using stereological methods. Methods: Eighteen neonatal male mice were randomly divided into three groups. Group A, inhaled sevoflurane at a concentration of 1.5%; Group B, inhaled sevoflurane at a concentration of 3%; and Group C (control group), inhaled only 100% oxygen. Treatments were applied for 30 min a day for 7 consecutive days. The hippocampal volume, dendrite length, number of neurons, and number of glial cells were evaluated in each group using stereological estimations. Results: We identified a ∼2% reduction in the volume of the hippocampus in Group A compared to Group C. Mean hippocampal volume was ∼11% smaller in Group B than it was in Group C. However, these differences in hippocampal volume between the groups were not statistically significant (p > 0.05 for all). As for the number of neurons, we found significantly fewer neurons in Group A (∼29% less) and Group B (∼43% less) than we did in Group C (p < 0.05 for both). The dendrite length was ∼8% shorter in Group A and ∼11% shorter in Group B than it was in Group C. Conclusions: Repeated exposure to sevoflurane, regardless of the concentration, reduced the volume of the neonatal mouse hippocampus, as well as the number of neurons and dendrite length.

Resumo Justificativa e objetivos: O cérebro em desenvolvimento é mais vulnerável ao risco ambiental do que o cérebro já desenvolvido. Avaliamos os efeitos da exposição repetida a diferentes concentrações de sevoflurano sobre o hipocampo de ratos neonatos com o uso de métodos estereológicos. Métodos: Dezoito ratos neonatos foram divididos aleatoriamente em três grupos. O Grupo A foi submetido à inalação de sevoflurano a uma concentração de 1,5%; o Grupo B foi submetido à inalação de sevoflurano a uma concentração de 3%; o Grupo C (controle) foi submetido à inalação de apenas oxigênio a 100%. Os tratamentos foram aplicados durante 30 minutos por dia, durante sete dias consecutivos. Volume do hipocampo, comprimento do dendrito, número de neurônios e número de células gliais foram avaliados em cada grupo com o uso de estimativas estereológicas. Resultados: Identificamos uma redução de ∼2% no volume do hipocampo no Grupo A em comparação com o Grupo C. O volume médio do hipocampo foi ∼11% menor no Grupo B do que no Grupo C. Entretanto, essas diferenças no volume do hipocampo entre os grupos não foram estatisticamente significativas (p > 0,05 para todos). Quanto ao número de neurônios, encontramos um número significativamente menor de neurônios no Grupo A (∼29% menos) e no Grupo B (∼43% menos) do que no Grupo C (p < 0,05 para ambos). O comprimento do dendrito foi ∼8% menor no Grupo A e ∼1% menor no Grupo B que no Grupo C. Conclusões: A exposição repetida ao sevoflurano, independentemente da concentração, reduziu o volume do hipocampo neonatal de camundongos, bem como o número de neurônios e o comprimento dos dendritos.